《微生物学》(微生物学理论)

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注本练习供在校微生物学学习参考。

每章由两部分组成名词和练习的解释，练习的答案已经给出。

第一章导言1。术语或名词。微生物太小，肉眼看不清楚。这些微生物包括没有细胞结构就不能独立生存的病毒和亚病毒(类病毒、假病毒、朊病毒)；具有原核细胞结构的真细菌、古细菌、具有真核细胞结构的真菌(酵母、霉菌、蘑菇等。)、单细胞藻类、原生动物等。但其中有几个肉眼可见。

2。微生物学是研究肉眼难以看到的微生物的生命活动的科学。它需要特殊的技术来分离和培养这些微小的有机体。

3.分子微生物学(molecularmicrobiology)是在分子水平上研究微生物生命活动规律的科学。

4.细胞微生物学主要研究微生物和宿主细胞之间的关系。

5.微生物基因组学是研究微生物基因组编码的分子结构、信息内容和基因产物的科学。

6.自发生成是一种古老的理论，认为所有活的生物体都可以从无生命的物质中自然产生。

7。荷兰商人AntonyvanLeeuwenhoek (1632—1723)是第一个真正看到并描述微生物的人。他用自制的放大50 ~ 300倍的显微镜发现了微生物世界(当时称为微小动物)，揭示了一个全新的3354微生物世界的生物世界。

8.LouisPasteur (1822-1895)，法国人，原是化学家，后转向微生物学研究领域，为微生物学的建立和发展做出了突出贡献，成为微生物学的奠基人。主要贡献烧瓶实验彻底否定了自生学说，建立了致病学说，促进了微生物学的发展。对鸡霍乱进行了研究，发现病原菌减毒可以诱导免疫预防鸡霍乱。后来他研究了牛、羊的炭疽病和狂犬病，制成狂犬病疫苗，证实了他的免疫理论，为人类疾病防治做出了巨大贡献。分离出许多引起发酵的微生物，证实酒精发酵是由酵母引起的。还发现乳酸发酵、醋酸发酵和丁酸发酵都是由不同的细菌引起的，为进一步研究微生物的生理生化和工业微生物学奠定了基础。

9.罗伯特罗伯特科赫(1843—1910)，德国人，是著名的细菌学家，曾经是一名医生，在病原细菌的研究方面做出了突出的贡献(1)证实炭疽是炭疽的病原体；(2)结核病的病原体被分离培养出来，在当时是一种死亡率很高的传染病，所以罗伯特科赫获得了诺贝尔奖；(3)提出了证明微生物是否是某种疾病病原体的基本原理——罗伯特科赫定律。他也是微生物学的创始人。

10.连德武(1879-1960)，中国广东象山人，著名的公共卫生学家，中国海港检疫的创始人。他运用微生物学理论和技术研究和预防鼠疫和霍乱的病原体。他在中国第一个建立了卫生防疫组织，培养了第一支预防鼠疫的专业队伍。在他的领导和组织下，有效地战胜了1910年至1911年和1920年至1921年中国东北地区的鼠疫疫情，在国际上被誉为著名的防疫专家。1911年4月世界鼠疫大会在中国沈阳召开时，他是大会主席。著有《肺鼠疫》、《鼠疫概论》、《中国医学史》等。

11。汤(1879—1958)是我国湖南醴陵著名的医学微生物学家，在医学细菌学、病毒学、免疫学等领域做出了卓越的贡献，尤其是成功应用卵黄囊接种法从患者结膜屑中分离培养出沙眼衣原体，在世界上证实了沙眼衣原体的存在，成为医学微生物学的重大成就。

12。严重急性呼吸综合征的简称，严重急性呼吸综合征，在中国称为SARS，也简称SARS。

第二，填空。

1.你不能过分强调微生物和人类之间关系的重要性。微生物是一把非常锋利的双刃剑，它带给人类的也是如此。

2.1347年引发的一场瘟疫几乎毁灭了整个欧洲，1/3的人(约2500万人)死于这场灾难。

3。2003年，非典在我国部分地区迅速蔓延，正常的生活和工作节奏被严重打乱。这是因为SARS传染性很强，是由一种新型的SARS引起的。

4.微生物包括细胞结构不能独立生存的病毒和亚病毒(类病毒、假病毒、朊病毒)；具有细胞结构的真细菌和古细菌；具有细胞结构的真菌(酵母、霉菌、蘑菇等。)、单细胞藻类、原生动物等。

著名微生物学家罗杰斯特兰尼尔(Roger Stranier)提出，确定微生物的领域，不仅要根据微生物的大小，还要根据动物和植物的差异。

6.专注于微生物和宿主细胞之间关系的新学科领域被称为。

7.公元6世纪(北魏)，贾思勰的代表作详细记载了制曲、酿酒、酱醋的技术。

8-19世纪中期，以法国和德国科学家为代表的科学家揭示了微生物是腐败、发酵和人畜疾病的原因，建立了分离、培养、接种、灭菌等一系列独特的微生物技术，奠定了微生物学的基础，开辟了医学和工业微生物学等分支学科。微生物学的创始人。

9.20世纪中后期，由于微生物学等技术的渗透和应用的扩大和发展，动植物细胞也可以像平板或三角瓶中的微生物一样在发酵罐中分离、培养和生产。

10.目前已完成基因组测序的三大类微生物分别是、和。随着基因组作图和测序方法的不断进步和完善，基因组研究将成为一种常规的研究方法，这将导致从本质上认识微生物本身以及利用和改造微生物的质的飞跃。

11.在发现后的短短300年间，特别是20世纪中期以后，微生物被广泛应用于人类的生活和生产实践中，并形成了以下两大生物产业动物和植物。

多项选择题(4个答案中的1个)

1.今天，一种新的瘟疫正在全世界蔓延，它是由一种病毒引起的()。

(1)瘟疫(2)天花(3)艾滋病(4)霍乱

2.微生物在整个生物界的分类地位，无论是五界体系还是三界体系，微生物都占据了()的席位。

(1)少数(2)极少数(3)不太多(4)绝大多数

3.随着微生物学的不断发展，形成了基础微生物学和应用微生物学，可分为()的子学科。

(1)几个不同点(2)几个不同点(3)很多不同点(4)四个不同点。

4.从公元9世纪到10世纪，中国发明了()。

(1)用分蘖酿酒；(2)用鼻苗法接种痘病毒；(3)烘烤面包；(4)酿造果酒。

5.安东列文虎克制造的这台显微镜的放大倍数是()倍。用这台显微镜，他可以清楚地看到细菌和原生动物。

(1)50—300 (2)10左右(3) 2—20 (4) 500 ~ 1 000

6.据有关统计，20世纪诺贝尔生理学或医学奖获得者中，从事微生物问题研究的占()。

(1)1/10 (2)2/3 (3)1/20 (4)1/3

7.为了否定自生论，巴斯德在前人工作的基础上进行了多次实验，其中著名的()无可辩驳地证明了空气中确实含有微生物，微生物造成了有机物的腐败。

(1)厌氧试验(2)灭菌试验(3)烧瓶试验(4)菌株分离试验。

8.罗伯特科赫提出了基本原理3354()来证明一种微生物是否是某种疾病的病原体。

(1)巴斯德原理(2)罗伯特科赫原理(3)菌株原理(4)免疫原理。

9.微生物基因组序列分析表明，在一些微生物中存在一些与人类某些遗传疾病相似的基因，我们可以利用这些微生物作为()来研究这些基因的功能，为理解庞大的人类基因组及其功能做出重要贡献。

(1)模式生物(2)受体(3)供体(4)突变材料

10.我国学者唐教授的()分离与确证研究成果是具有国际领先水平的开创性成果。

(1)鼠疫杆菌(2)沙眼病原体(3)结核分枝杆菌(4)天花病毒

是非题

1.微生物是人类生存环境中不可或缺的成员。有了它们，地球上的东西才能循环，否则地球上所有的生命都无法繁衍。

2.由于现代生物技术的应用，特别是基因疗法和基因工程药物的产生，许多传染病被攻克，如结核病、疟疾、霍乱、天花等。不太可能东山再起。

今天的研究表明，所有的细菌都是肉眼看不见的。

4.微生物学家想要获得纯种微生物，通常他们要先从微生物种群中分离出所需的纯种微生物，然后进行培养。所以一般用特殊的技术，比如消毒灭菌，培养基的应用来研究微生物，这也是区别于动物和植物学的。

巴斯德不仅通过烧瓶实验证明了微生物的非自然发生，推翻了争论已久的自生论，还做出了其他许多重要贡献，如证明乳酸发酵是由微生物引起的、制作狂犬病疫苗、建立巴氏杀菌法等。

6.细菌学、真菌学、病毒学、原生动物学、微生物分类学、发酵工程、细胞工程、基因工程、工业微生物学、土壤微生物学、植物病理学、医学微生物学和免疫学都是微生物学的分支。

7.尽管微生物学比高等动物和植物学建立得晚，但它发展得很快。其中一个重要原因是动植物结构的复杂性和技术方法的限制相对较慢，尤其是人类遗传基因的限制。

8.微生物学与迅速发展的分子生物学理论和技术以及其他学科的结合，使微生物学全面进入分子研究的层面，其分支——分子微生物学应运而生。

9.在基因工程的推动下，传统的微生物发酵工业在许多方面发生了质的变化，成为现代生物技术的重要组成部分。

10.DNA重组技术和基因工程的出现导致了微生物学的许多重要发现，包括质粒载体、限制性内切酶、连接酶和逆转录酶。

11.微生物体积小，结构简单，生长周期短，容易大量繁殖，容易变异。所以相对于动物和植物来说，在实验中操作是非常困难的。

12.现在，对微生物学的研究是不可替代的，并将蓬勃发展，因为微生物具有其他生物所不具备的生物学特性；它还具有其他生物所共有的基本生物学特征，以及它的广泛应用。

问答题

1.用具体例子说明人类与微生物的关系。

2.为什么巴斯德和罗伯特科赫是微生物学的创始人？

3.为什么微生物学起步比动物学和植物学晚，但发展非常迅速？

4.简述微生物学在生命科学发展中的地位。

5.试述微生物学的发展前景。

3.回答练习，填空。

1.巨大的利益和残酷的毁灭2。鼠疫耶尔森菌3。病毒4。没有原核真核生物。研究技术。细胞微生物学7。齐敏舒窈8。巴斯德罗伯特科赫巴斯德罗伯特科赫9。消毒、灭菌、隔离和培养。模式微生物、特殊微生物、医学微生物。第三大产业。

1.(3) 2.(4) 3.(3) 4.(4) 5.(1) 6.(4) 7.(3) 8.(2) 9.(1) 10.

是非题1。2.-3.-4.5.6.-7.8.9.10.-11.-12.

问答题

1.微生物与人类关系的重要性可以从两个方面来分析它们给人类带来巨大的好处，也可能带来巨大的危害。例子包括面包、奶酪、啤酒、抗生素、疫苗、维生素和酶等重要产品的生产；微生物是人类生存环境中不可或缺的成员，可以循环地球的物质。过去瘟疫的流行，现在一些病原体正在全世界传播，许多被征服的传染病正在卷土重来。食品腐败等等。

2.这是因为巴斯德和罗伯特科赫为微生物学的建立和发展做出了突出贡献，使微生物学作为一门独立学科开始形成。巴斯德完全否定了自然发生论；发现减毒致病菌可诱导免疫，制成狂犬病疫苗进行接种。发酵被证实是由微生物引起的；创造巴斯德消毒法等。罗伯特科赫在病原细菌的研究方面取得了卓越的成就证实了炭疽是炭疽的病原体，发现了结核病的病原体，提出了——罗伯特科赫原理的基本原理来证明某种微生物是否是某种疾病的病原体，创造了分离纯化微生物的技术。

3.从以下几个方面分析原因微生物具有其他生物不具备的生物学特性；微生物具有其他生物共有的基本生物学特征；该微生物体积小，结构简单，生长周期短，易于大量培养，易于变异，重复性强，非常易于操作。动植物由于结构的复杂性和技术方法的限制，发育缓慢。微生物的广泛应用可以迅速满足现代学科、社会和经济发展的需要。

4.20世纪40年代，随着生物学的发展，许多生物学难以解决的理论和技术问题变得非常突出，尤其是遗传学中的争议，使得微生物这种简单而完整的生物成为生物学研究的明星。微生物学迅速与生物学的主流融合，被推到了整个生命科学发展的前沿。它取得了飞速的发展，对整个生命科学的发展(例如)做出了巨大的贡献，在生命科学的发展中占有重要的地位。

5.微生物学的发展前景可以从以下几个方面来探讨微生物基因组学的研究将全面展开；微生物生态学、环境微生物学、细胞微生物学等。其重点是了解微生物、微生物与其他生物、微生物与环境之间的相互作用，将在基因组信息的基础上取得重大进展，并对人类的生存和健康发挥积极作用。将更加关注微生物生命现象的特征和共性；与其他学科实现更广泛的交叉，获得新的发展；微生物产业将呈现全新的局面。这种文化可以被很好地研究、利用，其结果可以被重复。

第二章微生物的纯培养和显微技术一、术语或名词1。菌落(c010ny)具有一定形态结构的子细胞生长群，肉眼可见，由单个微生物细胞在合适的固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度而形成3354。

2.草坪固体培养基表面的众多菌落连接在一起时形成的微生物生长群。

3.培养皿由玻璃或透明塑料制成的圆形皿底和皿盖组成，皿盖可以盖住皿底，防止空气中的微生物污染。它的英文名字是为了纪念它的发明者理查德佩特里。

4.纯培养物是由微生物组成的细胞群，通常由单个细胞的生长和繁殖形成。

5.培养基是微生物生长和繁殖的营养培养基。根据固化剂的含量，分为固态、半固态和液态三种。

6。无菌技术是在分离、转移和培养纯微生物时，防止纯微生物被环境中的微生物污染或自身污染环境的技术。

7.培养皿常简称平板，是指固体培养基倒入无菌平板中冷却固化后形成的培养基平面

8.稀释倾注平板法将待分离物质稀释，与已融化冷却至50左右的琼脂培养基混合。摇匀，做一个可能含有细菌的培养皿。培养后，分离的微生物菌落在固体培养基的表面和内部生长。

9。涂布平板法将稀释后的微生物悬液均匀涂布在培养平板表面，然后保温培养，以获得固体培养基表面微生物菌落的生长和分离。

10.划线平板法用接种环在培养板表面划线微生物，使微生物细胞数随划线次数增加而减少，并逐渐分离。培养后，在固体培养基表面获得分离的微生物菌落。

1.稀释振荡管法(dilutionshakeculturemethod)稀释待分离的材料，然后将其与熔化的材料混合并冷却至

50琼脂培养基，摇匀，然后用石蜡覆盖。培养后，分离的微生物菌落在琼脂柱中间生长。

12.单细胞分离法(singlecellpickupmethod)利用显微操作技术直接挑出微生物的单细胞(孢子)，培养后获得纯培养物。

13.富集培养(enrichmentculture)是利用不同微生物之间生命活动的差异，配制特定的环境条件，使只有适应条件的微生物才能旺盛生长，从而大大增加其在群落中的数量，从自然界中分离出所需的特定微生物。

14.二元培养(two-component culture)是由两种具有特定关系(如寄生或捕食)的微生物组成的混合培养物。

15.原子力显微镜(AFM)扫描探针显微镜，用一个小探针在恒定高度扫描样品表面，用一个激光装置监测探针随样品表面的波动，以获得样品表面形貌的信息。

16.明视野显微镜。这种显微镜的照明方式是透射照明，即光线直接进入视野，在相对明亮的背景下形成暗的物体图像。

17.聚焦扫描激光显微镜(CSLM)这种显微镜以激光为光源，一次只照射一个点，从而大大减少了样品其他部分发出的杂散光的干扰。观测时，用激光或载物台扫描，经计算机处理，最终得到对比度鲜明、分辨率高的三维数字图像。

18.荧光显微镜。这种显微镜用紫外或蓝紫光照射荧光染料染色的样品，然后观察激发的荧光形成的物像。

19.数值孔径决定了显微镜物镜分辨率性能的物理指标，该指标取决于物镜的角度以及载玻片和透镜之间的介质的折射率。

20.相差显微镜。这种光学显微镜通过一种特殊的装置，将样品不同部位折射率和细胞密度的微弱差异，转化为人眼可以感知的明暗差异。它可以直接观察透明的活细胞及其内部结构，无需染色。

21.分辨力辨别两点间最小距离的能力。距离越小，分辨率越高。

22.扫描电子显微镜(SEM)这种电子显微镜用电子束扫描样品表面，收集表面发射的二次电子，形成样品的表面像。

23.扫描探针显微镜通过在物体表面移动敏锐的探针来研究表面特征的显微镜(如扫描隧道显微镜)。

24.扫描隧道显微镜(scanning tunnelingmicroscope)是扫描探针显微镜的一种，用微小的探针扫描样品表面，通过检测针尖与样品之间隧道电流的变化来形成物像。

25.透射电子显微镜(TEM)这种显微镜利用电子束透射样品，利用磁透镜将散射的电子聚焦成图像。

26.对比被观察物体与背景不同的程度。

27.暗场显微镜。这种显微镜使用专门的聚光镜进行斜向照明，样品反射或折射的光进入物镜成像。

28.固定在样品制备过程中，使整个身体及其细胞的内外结构保持在原位的过程。

29.负染(negative dying)染料使背景颜色变深，样品不着色。

30.菌丝体(菌丝体)分枝的菌丝聚集在一起，见于真菌和一些细菌中。

31.菌丝是大多数霉菌和一些细菌的结构单位，是一种管状细丝。

32.双球菌分裂后成对排列。

33.球菌细胞大致是球形细菌。

34.螺旋菌是一种坚硬的螺旋形细菌。

35.螺旋体是一种具有周质鞭毛的柔性螺旋细菌。

36.杆状细菌。

37.伪足细菌是具有柄、菌丝、附属物和其他细胞质延伸物、杆状或纺锤状细胞和特征性细长柄的细菌。

38.霉菌一种以多细胞丝状菌落形式存在的真菌。

39.真菌(真菌)是真核微生物，有线粒体，无叶绿体，根、茎、叶不分化，用无性和有性孢子繁殖。

40.酵母(酵母):单细胞真菌。

41.藻类是能够进行光合作用的真核微生物。

42.原核生物是一种单细胞真核微生物，缺乏真正的细胞壁，有移动能力，吃营养。

第二，填空。

1.对动植物的研究可以以尸体为单位进行，而对微生物的研究一般使用——具尸体。

2.在微生物学中，通过在人工规定的条件下培养和繁殖而获得的微生物群称为培养物，其中仅

3.，培养微生物的器具在使用前必须先使用，这样容器就不含微生物了。

4.用培养板纯培养和分离微生物的方法有和。

5.由生长在特定培养基上的微生物形成的菌落或苔藓通常具有稳定的特性，这可以是微生物发展的重要基础。

6.微生物保藏的目的是将保藏的菌株保存一段时间。

7.，采用冷冻法时，保存温度越高，保存效果越好。

8、是影响显微镜观察效果的三个重要因素。

9.一台光学显微镜能达到的最大有效放大倍数是，此时一般使用X目镜和X物镜，要在物镜和载玻片之间加上。

10.用明场显微镜观察未染色的标本(如活细胞)时，光的总和没有明显变化，其形态和内部结构往往难以分辨。

1.在光线的照射下，荧光物体会在黑暗的背景下呈现为亮色物体，这就是荧光显微镜的原理。

12.透射电子显微镜使用电子，分辨率比光学显微镜有很大提高。但镜筒必须是一个环境，形成的图像只能通过或透过才能观察和记录。

13.在显微镜下，不同细菌的形态可以说是五花八门，五彩缤纷，但就单个生物而言，其基本形态可分为，和，三种。

14.所有的霉菌细胞都由分枝或不分枝的菌丝组成。许多菌丝缠绕在一起，称为。在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基中吸收营养，称为；另一部分长到空气中，称为。一些气生菌丝发育到一定阶段，分化成。

15.它是一种缺乏真正细胞壁的单细胞真核生物，细胞通常无色，具有移动能力，进行吞噬和营养。它们很小，大多数需要显微镜才能看到。

多项选择题/从4个答案中选择1个//

1.在常用的培养微生物的仪器中，()是专门为培养微生物而设计的。

(1)平板(2)试管(3)烧瓶(4)烧杯

2.()可以用来分离培养能在科学家设计的特定环境中生长的微生物，虽然我们不知道在这种特定环境中能生长什么微生物。

(1)平板选择(2)富集培养(3)稀释涂布(4)单细胞显微分离。

3.下列哪一项不属于稀释倒平板法的缺点？( )

(1)有时菌落分布不够均匀；(2)热敏细菌容易被烫伤致死；(3)严格需氧菌受固定在培养基中的影响；(4)难以在低环境温度下操作。

4.以下哪种方法一般不用于继代培养？( )

(1)琼脂斜面(2)半固体琼脂柱(3)培养板(4)摇瓶发酵

5.冷冻真空干燥之所以能长期保存微生物，是因为微生物处于()的环境中，代谢水平大大降低。

(1)干燥、缺氧和低营养(2)低温、干燥和缺氧(3)低温、缺氧和低营养(4)低温、干燥和低营养。

6.()对光学显微镜的观察效果影响最大。(1)目镜(2)、物镜(3)和聚光镜(4)的总放大倍数

7.暗场显微镜和明场显微镜的区别是()。

(1)目镜(2)、物镜(3)和聚光镜(4)的样品制备

8.相差显微镜使人们能够在不染色的情况下清晰地观察到活细胞和细胞中一些在普通光学显微镜和暗场显微镜下看不到或看不到的精细结构，因为它改变了样品不同部分之间的光()，使人眼能够察觉。

(1)波长(2)颜色(3)相位(4)振幅

9.()非差异染色。

(1)耐酸染色(2)革兰氏染色(3)活菌染色(4)孢子染色。

10.细菌的下列哪一个特征一般不用于细菌的分类和鉴定？( )

(1)球菌的直径(2)球菌的分裂和排列(3)杆菌的直径(4)杆菌的分裂和排列。

是非题

1.为了防止杂菌的污染，特别是空气中杂菌的污染，试管和玻璃烧瓶要用适当的塞子塞紧，通常是棉塞，或各种金属、塑料和硅胶盖，使用前用高温和干热灭菌。

2.所有微生物都能在固体培养基上生长。，用固体培养基分离微生物是微生物学最重要的实验技术。

3.所有媒体都是选择性媒体。

4.通过直接挑取平板上形成的单菌落，可以获得微生物的纯培养物。

5.稀释摇管法分离的微生物均为厌氧微生物。

6.冷冻真空干燥保藏法和液氮保藏法是目前最常见和最重要的微生物保藏方法，大多数专业菌种保藏机构都采用这两种方法作为主要的微生物保藏方法。

7.光学显微镜的分辨率与介质的折射率有关。由于芳香沥青的介质折射率(约1.5)高于空气折射率(1.0)，油显微镜的观察效果要优于高倍显微镜。目前，科学家正在寻找比芳香沥青折射率更高的介质，以进一步提高光学显微镜的观察效果。

8.与其他电子显微镜相比，扫描隧道显微镜最大的技术突破是可以观察活体样品。

9.与光学显微镜相比，电子显微镜的分辨率虽然有了很大的提高，但还是拍不出彩色照片。

10.和动植物一样，细菌细胞也会经历从小到大的过程。，在同等条件下，显微镜观察应选择成熟的细菌，而不是年轻的细菌，这样可以看得更清楚。

11.霉菌和酵母是没有分类学意义的常见名称。

问答题

1.，严格的无菌操作是所有微生物工作的基本要求。但在极端嗜盐菌的分离培养过程中，往往将培养板倾倒在普通实验平台上，不点亮酒精灯，在日常环境中直接打开皿盖观察挑取菌落，但不影响研究结果。你知道为什么吗？

2.如果想从环境中分离出厌氧固氮菌，应该如何设计实验？

3.为什么光学显微镜的目镜通常是15X？可以使用放大倍数更大(比如30x)的目镜来进一步提高显微镜的总放大倍数吗？

4.为什么透射电镜和扫描电镜对样品厚度和大小的要求会有这么大的差别？有没有可能用扫描电镜观察样品内部结构，用透射电镜观察表面结构？

5.电子显微镜制备和观察生物样品时应注意的问题探讨。

6.观察和描述细菌的细胞形态需要注意哪些方面？你能快点吗

3.回答练习，填空。1.第二组。纯3。对任何有机体进行消毒。稀释倾注平板法、涂布平板法、平板划线法5种。分类和识别。死亡污染变异7。低(高)好(差)8。放大对比分辨率9.1 000~1 500x 1 0或15 90或1 00香沥青10。波长振幅11。紫外线灯12。光源真空荧光屏照片13。球形杆螺旋14。营养菌丝气生菌丝。

1.(1) 2.(2) 3.(1) 4.(4) 5.(2) 6.(2) 7.(3) 8.(4) 9.(3) 10.(4)

是非题

1.- 2.- 3.4。- 5.- 6.

7.- 8.9.10.- 11.

问答题

1.为了培养极端嗜盐菌，需要向培养板中加入非常高浓度的氯化钠(25%)。实验室环境中的一般微生物无法在这种选择性培养基上生长，所以即使实验过程中不采取无菌技术，也不会影响实验结果。

2.(1)根据选择性分离原理，设计无氮培养基。在这种培养基上生长的细菌的氮应该来自固氮。(2)将环境样品(如土壤样品)稀释并涂在选择板上，并将其置于厌氧池中。厌氧池采用物理和化学方法除氧保氮。培养后生长在基质上的细菌应为厌氧固氮菌或兼性厌氧固氮菌。(3)挑取一定数量的菌落，种在两个缺氮选择平板上，置于厌氧罐内外保温培养。兼性厌氧固氮菌可以在厌氧池内外生长，但不能在厌氧池外的平板上生长。厌氧池内平板上长的是可能的厌氧固氮菌。(4)将分离的厌氧固氮菌菌落样品串联稀释，涂布于相应的选择平板上，重复上述步骤，直至获得厌氧固氮菌的纯培养物。

3.光学显微镜的分辨率受到光源波长和物镜性能的限制。当采用波长最短的可见光(4.50nnl)作为光源时，油镜下可达到的最大分辨率为0.18 m，由于肉眼的正常分辨率一般在0.25mm左右，光学显微镜的最大有效总放大倍数只能达到1 000 ~ 1 500倍。油镜的放大倍数是100倍，所以显微镜配置的目镜通常是15倍，选择更大放大倍数的目镜(如30倍)来进一步提高显微镜的放大倍数，对提高观察效果并无帮助。

4.(1)透射电镜的成像原理与普通光学显微镜相似，成像时作为光源的电子束要穿透样品。由于电子束的穿透能力有限，用透射电镜观察时，样品必须很薄。不过SEM的成像原理和电视或者传真照片差不多。图像是通过收集样品表面激发的二次电子形成的，所以对样品的厚度没有特殊要求。(2)扫描电子显微镜(SEM)一般用于观察样品的表面结构，但通过样品制备过程中的冷冻蚀刻技术，也可以用SEM观察样品的内部结构，得到三维图像。(3)透射电镜一般通过超薄切片技术观察样品的内部结构，但在样品制备过程中，也可以通过复制技术用透射电镜观察样品的表面结构。

5.(1)电子束的穿透能力电子束的穿透能力非常有限，超薄切片是透射电镜的基本实验技术。相比之下，SEM对样品的大小和厚度没有严格的要求。(2)生物组织的特性生物组织的主要成分之一是水。如果将生物样品不经处理直接放入电子显微镜，镜筒内的高真空必然导致样品严重脱水，样品原有的空间构型会丧失。，通常不可能用电子显微镜观察体内的生物样品。而且由于生物样本容易受损，在固定、干燥、染色等处理过程中，一定要时刻注意尽可能保持样本在活体状态下的精细结构，不发生严重扭曲。，在扫描电镜的使用中，除了样品的干燥外，还需要样品具有一定的导电性，以减少样品表面电荷的积累，获得良好的二次电信号。而生物样品一般不导电，所以扫描电镜一般需要在生物样品表面镀一层金属膜。(3)增加样品的对比度在显微镜观察时，只有当样品具有一定的对比度时，才能获得清晰的图像。光学显微镜可以通过各种染色技术增加样品的对比度，得到样品的彩色图像。但在电子显微镜的使用中，不使用有色染料，因为两种不同的颜色在电子显微镜中是无法区分的。电子显微镜下生物样品不同结构之间的对比通常是通过染色或喷洒重金属盐来获得的。所有的亲金属结构都具有增强的散射和吸收电子的能力，容易形成亮暗的电子像。而且由于电子图像是由不同的电子密度形成的亮度差形成的，所以电子显微镜得到的电视或摄影图像都是黑白的。

6.(1)要用稀释涂布等方法检查确认待测菌株的纯度、群落形态和生理特性。(2)选用正常新鲜培养基和新鲜培养物进行培养观察，避免一些理化条件或培养时间过长对细胞形态的影响。(3)报告细胞大小时，应选择细胞试验的平均数，并记录所用的实验方法，包括培养条件、培养时间、样品制备方法和染色方法。(4)细菌、酵母和原生动物可以在大小和形态上加以区分。酵母和原生动物都是大个体，一般可以用低倍显微镜观察到。酵母细胞一般呈椭圆形、圆形、圆柱形或柠檬形，无运动性。原生动物细胞形态多变，可以移动。相比较而言，细菌细胞一般比较小，需要高倍镜或者油镜才能看清楚。

附件显微镜类型对比

光被透射照亮，图像处于明亮的背景中。用于光学显示

微镜最基本的配置便宜且易于使用。

在明视野显微镜下难以看清的活细胞的观察；观察不易染色或染色过程容易损坏的细胞(例如，检测梅毒螺旋体)；观察活细胞的运动。

用荧光染料染色或用荧光抗体处理的样品在紫外线照射下和黑暗中可以激发各种波长的可见光

在背景中形成明亮的彩色图像。

对环境的直接观察；或者直接检测医学样品中的特定病原微生物(使用特定的荧光抗体)。

作为光源，激光一次连续照射样品的一个点。

扫描后，通过计算机处理获得二维或三维样本。

图像。显微镜很贵。

利用电子束作为聚焦成像的光源，分辨率较光学显微镜有很大提高。仪器庞大，价格昂贵，对工作环境和操作技术要求高。

用电子束扫描样品表面，收集形成的二次电子的图像。分辨率远高于光学显微镜。这种仪器体积庞大，价格昂贵，而且

分辨率更高，可以在生理条件下观察生物大分子或细胞结构。仪器体积小，价格相对便宜。

里面和外面有两层膜。子宫内膜可形成嵴，嵴上有大量的颗粒体(ATPase复合体)。基质含有TCA酶系统、70S核糖体和双链环状DNA。

它由内外膜、类囊体和基质组成。基质含有70 S核糖体和双链环状DNA。类囊体多，常折叠成基粒。

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