艾滋病补充试验的简单介绍

HIV检测的初筛结果如果为阳性，按照规范的检测流程，将进入到HIV的补充试验，做进一步的检测。下面就艾滋病的主要的补充试验，做一个浅显的介绍。

一、何谓补充试验

在《全国技术规范》（2009版）中，如筛查结果为阳性的样本，将进行下一步的确证试验艾滋病急性期，而在2015版中，国家将核酸试验以及特定条件下的替代检测，和确证试验一起作为补充试验，其检测结果都是可以作为判定是否感染艾滋病病毒的重要依据。

补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。

补充试验一般指：抗体确证试验，核酸试验，在特定条件下的替代检测。

抗体确证试验包括免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，这个是在日常工作中最常使用的检测方法。

核酸试验主要是对一些特殊的人员使用这种方法，结合临床，来判断是否感染了艾滋病病毒。

替代检测包括三种酶联免疫试验、三种快速试验或酶联免疫加快速试验。

二、确证试验

目前在实际工作中常用的确证试验，包括免疫印迹试验（WB），条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。

1、免疫印迹试验Western Blot（WB）：

WB 采用间接法检测样品中的抗HIV-1/HIV-2抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的HIV-1 蛋白分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带转移到硝酸纤维素膜上（或PVDF 膜）。将此膜切割成条状，每一膜条上均含有经电泳分离过的HIV抗原。待测样品经适当稀释后，加至硝酸纤维素膜上，恒温震荡，使其充分接触反应，血清中若含有HIV 抗体，就会与膜条上抗原带相结合。加入抗人-IgG 酶结合物和底物后，根据出现条带情况, 按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴性或不确定。

WB是目前特异性、敏感性均比较好的证实HIV感染的方法。也是国内HIV确认的首选方法，它是在DNA印迹术的基础上发展而来的新型技术。据报道，WB试验有2％的假阳性，多见于伴有自身免疫性疾病或打过疫苗的患者。如果将EIA和WB结合起来进行HIV特异性抗体检测,可以将检测结果的准确率提高至99％，假阳性率0.0006%。

2、条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）

RIBA/LIA 采用间接法检测样品中的抗HIV-1/HIV-2 特异性抗体，试剂盒的膜条上包被有HIV-1/HIV-2 不同的重组抗原片段，加入待测样品后，其中的相应抗体与抗原发生特异性的免疫反应；随后加入抗人IgG（碱性磷酸酶标记）与HIV 特异性IgG抗体相结合；加入显色底物后，在碱性磷酸酶的催化下，特异性抗体的结合部位出现肉眼可见的条带, 按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴性或不确定。

这个方法的原理和WB和相同的，只是由于膜条包被的是基因工程表达的或合成肽HIV重组抗原片段，不像是WB上的自然的灭活全病毒抗原，由于人工重组后艾滋病急性期，抗原的纯度较高，减少了一些干扰物质，所以特异性较好，不确定结果相对减少30%～60%，但同时由于只是选取了一些相对比较特异的条带，而不是全病毒的所有条带，所以敏感性相对要低一些，假阴性要高一些。

3、结果判断

确认方法的结果是要根据不同厂家的说明书来做判断的，看出现不同的条带来做判断，其中HIV-1抗体特异带包括：env带：gp160/gp120、gp41；gag带：p55、p24、p17（或p18）；pol带：p66（或p65）、p51、p31。HIV-2抗体特异条带包括：env带：gp140/gp105、gp36；gag带：p56、p26、p16；pol带：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36）。

一般是需要同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体阳性：①至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准。对于出现HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时呈HIV-1抗体阳性反应，报告HIV-1抗体阳性，不推荐进一步做HIV-2抗体确证试验；如果同时呈HIV-1抗体不确定或阴性反应，需用HIV-2型确证试剂再做HIV-2的抗体确证试验。

出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性，结果为不确定。

无HIV抗体特异带出现，结果可判为阴性。

以下为几种常见试剂盒的结果判断：

名称

抗原

方法

时间

封闭

条带

结果判定

MP(新加坡)

灭火全病毒

免疫印迹法

快速和过夜法

奶粉

11条：

GP160,

GP120,P66,P55,P51,GP41,P39,P31,P24,P17,GP36

阴性：无条带或只有P17

阳性：2条ENV及GAG或POL

不确定：出现特异性条带，但不足以判阳性

IMT（上海）

灭火全病毒

免疫印迹法

快速法

无

9条：

GP160,

GP120,P66,P51,GP41,P31,P24P17,HIV-2

阴性：无特异性条带

阳性：GP160,GP120,

GP41,P24出现任意两条带

不确定：出现特异性条带，但不足以判阳性

MIKROGEN(德国)

重组抗原

条带免疫法

快速法

奶粉

8条：GP120,GP41,

P55,P31,P24,P17,GP105,GP36

阴性：无检测线≧临界值

阳性：（GP120+GP41或GP105+GP36）≧临界值,或者一个ENV检测线（仅GP41或GP36）和至少一个GAG检测线（P24,P17）或POL检测线（P31,P51）≧临界值

不确定：根据各条带无法做出阴性或者阳性的判断

万泰（北京）

重组抗原

重组免疫印迹法

快速法

无

7条：GP160,GP120,

GP41,P31,P24,P17,GP36

阴性：无特异性条带

阳性：至少出现2天ENV带或1条ENV带和P24

不确定：不确定：出现特异性条带，但不足以判阳性

三、核酸试验

核酸检测是对感染者体内游离病毒的核酸RNA含量进行测定。通常使用血浆作为检测样品，根据不同检测要求改进的RNA提取技术使该实验也可用于多种体液及组织。

核酸检测作为补充实验可用于HIV-1 感染诊断，包括抗体复检试验有反应和抗体补充试验不确定样本的判定；急性期和晚期感染者的诊断。

针对对HIV-1 抗体筛查阴性、近期有流行病学史的个体,或确证结果不确定的样本,核酸检测可用于诊断HIV-1 急性期感染。

针对HIV-1 抗体筛查阳性或确证结果不确定的个体，结合流行病学史和临床病史，核酸检测可用于HIV-1 感染诊断。艾滋病晚期患者可能出现HIV 抗体反应不确定，可根据HIV 核酸检测结果，结合临床病史和CD4+T 淋巴细胞计数等情况，进行综合判断，确定临床诊断。

但核酸检测结果低于最低检测限并不能完全排除HIV-1 感染。

1、核酸定性试验：

全球目前正式用于临床诊断HIV-1 急性期感染的核酸检测试剂比较少，主要是美国FDA 批准的Gen-Probe 公司生产的Aptima HIV-1 RNA 核酸定性检测试剂和欧盟批准的Abbott M2000HIV-1 RNA/DNA 定性检测试剂。国内生产的用于血浆及其血液制品筛查的核酸检测试剂主要为Taqman 实时荧光PCR 检测试剂。

检测结果显示“有反应”或“检测到”，报告阳性；检测结果显示“无反应”或“未检测到”，报告阴性。核酸定性检测值低于最低检测限的结果，不能排除HIV-1感染，需根据流行病学史、临床病史和实验室相关指标进行综合判断。

2、核酸定量试验：

核酸定量检测原理主要基于靶核酸扩增RT-PCR和信号放大扩增，目前使用的病毒载量检测技术主要有三种：1、逆转录多聚酶链反应系统（RT-PCR）2、分枝DNA信号扩大系统（bDNA）3、核酸序列扩增系统（NASBA），三种技术都有核酸提取、扩增或信号放大、定量检测三部分组成。

定量的核酸检测可以作为HIV-1感染的确认，但更多的是作用是监测抗病毒药物治疗效果和监测疾病进展。

核酸定量检测过程中，由于可能会受到的污染，从而导致低病毒检测值的结果，所以一般是以5000 CPs/ml作为判断结果的阈值，检测值>5000 CPs/ml(或IUs/ml)，报告检测值；检测值≤5000 CPs/ml(或IUs/ml)，需再次采样检测，报告检测值，结果>5000 CPs/ml(或IUs/ml)，报告检测值，结果仍≤5000 CPs/ml，则需充分结合流行病学史、临床病史、CD4+T淋巴细胞计数和HIV-1抗体随访检测结果等进行综合判断。

目前国内外均没有商品化的HIV-2核酸检测试剂。

四、替代检测：

替代检测一般在一些特定条件下使用这种检测策略，例如高流行地区（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性恋，吸毒人群），就是用三种酶联免疫、三种快速试验或酶联加快速试验，进行检测，这个三种试剂均要经过使用地区中心实验室的评价。这个一般适用于某些特定的专项调查工作，在日常的工作中基本不使用这种方法。

五、补充试验的检测流程：